實時PCR實驗

簡要描述：實時PCR實驗（real-time PCR），屬于定量PCR（Q-PCR）的一種，以一定時間內(nèi)DNA的增幅量為基礎進行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對定量?？蓹z測mRNA，microRNA，lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。

更新時間：2022-12-22
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實時PCR實驗具體方法

1.SYBRGreen法：

在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。

SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

PCR產(chǎn)物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴增產(chǎn)物的單一性）

2.TaqMan探針法：

探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

二、服務流程

1、引物設計與合成
2、DNA/RNA抽提
3、反轉(zhuǎn)錄（針對RNA）
4、上機定量分析
三、客戶提供
1、全血、組織或細胞。
2、引物，或由豐核提供。
3、基因信息：目的基因名稱、物種和序列（或GenBank Accession Number）。
四、交付內(nèi)容
實驗報告：詳細操作步驟
原始數(shù)據(jù)：溶解曲線圖，擴增曲線圖，ct值

實時PCR實驗服務列表

項目	備注	周期
引物設計與合成		3個工作日
提取	RNA提取、miRNA提取、DNA提取	2個工作日
反轉(zhuǎn)錄		2個工作日
qPCR反應	SYBR Green方法，相對定量	2個工作日

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