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詳細介紹
簡介
MTT實驗，全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法，是一種常用于檢測細胞存活和生長的體外實驗方法。該方法基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源性MTT還原成不溶于水的藍紫色結晶甲臜（Formazan），而死細胞缺乏這種功能。通過測定溶液中甲臜的光吸收值，可以間接反映活細胞的數量。MTT實驗因其靈敏度高、經濟實用而被廣泛應用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等領域。
實驗步驟
1.細胞培養(yǎng)：將對數生長期的細胞接種到96孔板中，并在適宜的條件下培養(yǎng)至細胞單層鋪滿孔底。
2.藥物處理：向含有細胞的孔中加入不同濃度的測試藥物，并繼續(xù)培養(yǎng)一段時間。
3.MTT添加：向每個孔中加入MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)以允許活細胞將MTT還原。
4.終止培養(yǎng)：停止培養(yǎng)后，去除孔內的培養(yǎng)液，并用二甲基亞砜（DMSO）溶解甲臜結晶。
5.比色測定：在酶聯免疫檢測儀上測定各孔的吸光度值，通常在490nm或570nm波長處進行測量。
6.數據分析：根據吸光度值計算細胞的相對生存分數或抑制率，并進一步分析藥物的效力。
注意事項
1.MTT溶液應現配現用，并在避光條件下保存。
2.實驗過程中應避免交叉污染，并注意使用無菌技術。
3.在離心和吸液步驟中，應輕柔操作以保護細胞。
4.溶解結晶物時，應充分振蕩以確保wanquan溶解。
5.實驗結果的線性范圍通常建議在OD值0-0.7之間。
6.MTT法只能用來檢測細胞的相對數和相對活力，不能直接測定細胞的絕對數。
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